目的 构建微小核糖核酸31(miR-31)慢病毒载体质粒,并观察其对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响.方法 以包含miR-31基因的序列为目的片段,设计末端含有相应酶切位点的引物,PCR扩增目的片段,产物双酶切后插入线性化慢病毒载体中,构建miR-31慢病毒载体质粒并鉴定.将miR-31慢病毒载体质粒与包装质粒pPACKH1-GAG、pPACKH1-REV、pVSV-G共转染宫颈癌HeLa细胞,并进行慢病毒包装,检测miR-31慢病毒载体质粒滴度.取对数生长期HeLa细胞,随机分为空白对照组、miR-31组、空载体组,空白对照组不做任何处理,miR-31组予miR-31慢病毒载体质粒处理,空载体组予空载体慢病毒质粒处理.采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-31 mRNA表达;MTT法和细胞克隆实验检测各组细胞增殖能力,Transwell小室法检测各组细胞迁移能力.结果 成功构建重组慢病毒表达质粒,其病毒滴度为3×107 TU/mL.miR-31组miR-31 mRNA相对表达量明显高于空白对照组、空载体组(P均<0.05),而空白对照组与空载体组比较P>0.05.miR-31组细胞增殖和迁移能力均高于空白对照组、空载体组(P均<0.05),而空白对照组与空载体组比较P均>0.05.结论 成功构建了miR-31慢病毒载体质粒,建立了稳定过表达miR-31的宫颈癌HeLa细胞.稳定过表达miR-31的宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力明显
作者：王琳琳；胡晓霞；刘斐
来源：山东医药 2017 年 57卷 28期
