目的·构建可用于发现调节维甲酸受体(retinoic acid receptors,RARα)蛋白稳定性的化合物的细胞筛选体系.方法·对pMSCV质粒进行改造,插入绿色荧光蛋白(EGFP)-RARα 融合基因和红色荧光蛋白(DsRed)基因,两者之间以内部核糖体结合位点(IRES)序列分隔;构建成功的质粒稳定转染急性早幼粒细胞白血病细胞NB4,流式细胞术分析全反式维甲酸、丙戊酸钠、阿糖胞苷、来那度胺、依托泊苷、孟鲁司特纳及藤黄酸处理细胞后EGFP与DsRed的荧光信号的变化,间接反映RARα 蛋白表达水平;并通过Western blotting实验进一步验证阳性化合物对RARα 蛋白水平的影响.结果·成功构建了蛋白稳定性双荧光筛选体系,并发现丙戊酸钠可有效使RARα 蛋白的表达水平稳定.结论·双荧光筛选系统可用于调节RARα 蛋白稳定性的化合物的筛选.丙戊酸钠是一个新的稳定RARα 的化合物.该方法对建立稳定其他蛋白的化合物筛选系统具有参考价值.
作者：井博；陈鹏辉；高翔；徐媛媛；吴云昭；孙云；吴英理
来源：上海交通大学学报（医学版） 2017 年 37卷 4期
