目的:构建能表达ESAT6-CFP10融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗.方法:以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,克隆cfp 10基因,将其插入到pGEM-T-easy载体后与esat6基因连接,构建含有esat6和cfp 10融合基因的重组载体pGEM-e6c10.酶切消化pGEM-e6c10重组质粒,将esat6-cfp 10基因亚克隆到pDE22分泌表达穿梭载体,以电穿孔方法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌.PCR筛选到的阳性克隆经温度诱导后,SDS-PAGE和Western印迹检测表达蛋白的正确性.结果:可表达出相对分子质量约23 000的ESAT6-CFP10融合蛋白.Western印迹证明重组蛋白有较好的免疫原性.结论:获得能表达ESAT6-CFP 10融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌,为结核病的预防奠定了一定的基础.
作者：张海；师长宏；李羽；薛莹；柏银兰；王丽梅；高雪；姜泓；徐志凯
来源：生物技术通讯 2006 年 17卷 2期
