目的：克隆、表达人vasorin（VASN）蛋白。方法：利用PCR方法从HepG2细胞的cDNA中扩增获得目的基因，并插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET28a中，构建重组表达质粒pET28a-VASN，将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导后目的基因获得表达，对融合目的蛋白进行Ni2+金属螯合柱纯化。结果：内切酶鉴定及基因序列测定证实重组表达质粒构建成功；对目的蛋白进行了原核表达，SDS-PAGE显示相对分子质量为61×103的特异表达条带；Western印迹证实目的蛋白为VASN，且主要以包涵体形式存在；对经尿素变性的表达产物进行了亲和层析纯化，有利于以后的变性、复性过程。结论：获得了人VASN融合蛋白，为其进一步的生物学功能研究奠定了基础。
作者：丁红梅；赵强；王玮；李慧；刘农乐；李洁；苏雪婷；黄皑雪；房涛；李少华；邵宁生
来源：生物技术通讯 2014 年 1期
