目的 构建人降钙素原(procalcitonin,PCT)原核表达载体,获得高纯度PCT重组蛋白.方法 根据NCBI上PCT基因序列设计引物,利用PCR技术扩增PCT基因,构建PCT/pET-22b(+)重组表达载体,转化至大肠埃希菌(E.coli BL21中诱导表达;采用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,用western blot和肢体金法对其进行鉴定.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增产物约为350 bp.同源性比对分析结果表明,PCT基因片段(348 bp)成功插入pTG19-T载体,未出现碱基突变.用BamH Ⅰ和HindⅢ对重组表达载体双酶切,得到约为350bp和5 500 bp片段.SDS-PAGE电泳显示PCT重组蛋白以可溶性形式存在,Mr约14 000,经镍柱亲和层析法纯化后即可获得.western blot和PCT胶体金法结果呈阳性,显示融合蛋白含组氨酸标签(His-tag),成功表达出PCT重组蛋白.结论 应用重组DNA技术成功构建PCT基因融合重组表达载体,通过蛋白质表达纯化技术获得PCT融合蛋白.
作者：付涛；苏丹华；刘原；刘卿；吴亮；陈盛霞；姜旭淦
来源：临床检验杂志 2017 年 35卷 3期
