目的:构建特异抑制雌激素受体α(ERα)基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,检测其对ERα的干扰效果,并探讨其对MCF7细胞中乳腺癌干细胞含量的影响.方法:以人的ERα核酸序列为靶标,根据shRNA设计原则设计并化学合成特异的shRNA序列,经退火处理后与pSIH-H1质粒连接,转化大肠杆菌DHSα后挑取单克隆并测序;将该克隆进行病毒包装并感染乳腺癌MCF7细胞,用嘌呤霉素进行筛选,最终得到稳定克隆;收取细胞,用Western印迹和qRT-PCR检测ERα在mRNA及蛋白水平上的变化,流式细胞术检测敲低ERα能否影响MCF7乳腺癌干细胞的含量.结果:经测序分析表明目标shRNA序列成功插入载体,qRT-PCR检测稳定克隆,发现该shRNA能有效抑制目的基因的mRNA转录水平,同时Western印迹检测发现内源性ERα量明显下降;流式细胞术检测发现ERα敲低的MCF7稳定克隆中雌激素诱导的乳腺癌干细胞含量上升的现象被明显抑制.结论:设计并构建的抑制ERα的shRNA能够有效抑制ERα的表达,并下调MCF7细胞中乳腺癌干细胞的含量,为研究ERα在乳腺癌干细胞中的功能及机制奠定了实验基础.
作者：杜佩云；程龙；姜丽娜；陈立涵；林佳佳；叶棋浓；苏金为
来源：生物技术通讯 2015 年 26卷 3期
