[目的]构建BSV微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究.[方法]构建含RSV病毒前导序列(Leader,genomic promoter,Le)、转录起始信号(gene start,GS)、多克隆酶切位点、转录终止信号(gene end,GE)和尾随序列(Trailer,antigenomic promoter,Tr)的基因片段GRNP)启动子、克隆入载体px8δT和插入增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)等多步操作,获得RSV微型复制子重组质粒px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP.同时构建可表达大蛋白(Large protein,L)的质粒pcDNA3.1/L及表达转录延长/转录终止抑制因子(M2 ORF 1 protein,M2-1)的质粒pcDNA3.1/M2-1.通过脂质体法共转染RSV微型复制子质粒及四种RSV核壳体蛋白质粒至可表达T7 RNP的BSR T7/5细胞系,倒置荧光显微镜及流式细胞仪分析EGFP的表达情况.[结果]成功构建了px8δT/GSGE1/EGFP和px8δT/GSGE2/EGFP及pcDNA3.1/L和pcDNA3.1/M2-1,五质粒共转染BSR T7/5细胞,倒置荧光显微镜及流式细胞仪均观察到绿色荧光的表达.[结论]构建的BSV微型复制子具有转录和复制功能,将有助于进一步开展以BSV反向遗传操作为基础的RSV疫苗研发及药物筛选.

作者：唐倩；虞结梅；何金生；张梅；魏薇；付远辉；郑娴娴；王小波；张莹；洪涛

来源：微生物学报 2009 年 49卷 8期