报道一种适用于产朊假丝酵母Candida utilis的基因敲除系统，利用该敲除系统获得gsh1基因敲除杂合突变株。根据不同种属酵母菌γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白质的保守序列，克隆C.utilis SZU 07-01的gsh1基因；以商品化质粒pPICZalpha A为基础，构建gsh1基因的敲除载体pPICZalpha A-kan 3，其中，kan基因的启动子TEF被替换为来自于C.utilis SZU 07-01的GAP启动子(pGAP∶kan)。质粒电转化C.utilis，获得gsh1基因敲除杂合突变株C.utilis GSH-6。结合发酵培养得到的数据进行分析，突变株的γ-GCS酶活比出发菌株降低17.5％，GSH合成量降低61％，细胞干重降低18.5％。所构建敲除组件pGAP∶kan的成功应用为从分子水平研究C.utilis中谷胱甘肽(GSH)的生理功能提供了一种新借鉴。
作者：张君丽；卫功元；董红军；朱泰承；李寅
来源：微生物学通报 2011 年 38卷 6期
