目的：研究表明APC、Survivin 2种基因表达异常在结肠癌的发生发展中具有重要意义。构建Survivin shRNA、APC功能片段双基因共表达慢病毒载体并观察其能否于HT-29结肠癌细胞中成功表达，同时观察其是否能够对结肠癌细胞凋亡产生影响。方法构建3对互补Survivin shRNA 片段，从其中筛选出一条最佳干扰shRNA片段，与APC功能片段（ aa1020-1698）相连接构建双基因共表达质粒载体。将HT-29细胞分为实验组、空载组、空白组3组，慢病毒对HT-29进行侵染，观察是否有绿色荧光表达及对转染细胞进行realtime PCR、Western blot 检测 Survivin、APC基因表达水平。通过检测Caspase-3活性来检测细胞凋亡情况。结果①Real time PCR检测后显示对Survivin基因起到最佳干扰效果的片段为shR-NA3序列。②构建出的shRNA载体经过送序验证比对后，3对shRNA序列与最初设计的序列完全相同。在HT-29细胞中可见绿色荧光，实验组Survivin相对含量（31．71±1．49）较空载组（100±0）、空白组（95．12±2．15）明显减少（P＜0．05），APC mRNA表达水平较空载组（0±0）、空白组（0．51±0．15）明显增加（P＜0．05）。实验组Survivin蛋白相对含量（0．18±0．01）较空白组（0．24±0．04）、空载组（0．22±0．03）明显减少，APC蛋白
作者：袁禧先；段厚羽；曹锋；杜井峰；朱艳丽；程开；杨延涛
来源：医学研究生学报 2016 年 29卷 4期
