目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用.方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统pET32a-SEA-E.coliBL21DE3.采用SDS-PAGE检测rSEA表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rSEA.采用TCID50法测定rSEA对Vero细胞的细胞毒性并计算TCIC50值.采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEA体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞(PBMC)的促增殖作用以及对HepG2细胞(人肝癌细胞)、HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)的生长抑制作用.结果:与公布的相关序列比较,所克隆的SEA基因核苷酸序列相似性为100
作者：徐水凌；毛亚飞；张梅光；罗冬娇；严杰
来源：中国病理生理杂志 2007 年 23卷 1期
