目的:观察microRNA-486-5p(miR-486-5p)在氧化应激引起人骨髓间充质干细胞(hMSCs)凋亡中的作用并探讨其作用机制。方法:hMSCs经培养鉴定后分为5组:空白对照组、H2 O2组、miR-486-5p模拟物+H2 O2组、抑制物(αnti-miR)+H2O2组及相应的阴性对照(scrambled control)+H2O2组。荧光定量PCR(real-time PCR)检测氧化应激诱导hMSCs凋亡过程中miR-486-5p的表达变化。用脂质体分别转染miR-486-5p的模拟物、抑制物及阴性对照到hMSCs。应用MTT、Hoechst标记和流式细胞术的方法检测miR-486-5p对氧化应激介导细胞活性下降及凋亡效应的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白、Akt与其磷酸化水平,采用试剂盒测定caspase-3活性。结果:H2O2诱导hMSCs凋亡过程中miR-486-5p的表达较对照组显著下降(P<0.05)。与阴性对照组相比,在hM-SCs中过表达miR-486-5p,能使细胞在氧化应激情况下活性显著下降,凋亡发生率增高,蛋白Bcl-2/Bax 比值、caspase-3酶原含量及Akt磷酸化水平降低,caspase-3活性增强;而使用抑制物阻遏miR-486-5p的作用后,细胞在氧化应激条件下活性增加,凋亡发生率降低,蛋白Bcl-2/Bax比值及Akt磷酸化水平升高,caspase-3活性下降。结论:过表达miR-486-5p促进氧化应激引起的hMSCs凋
作者:胡明;黎佼;刘宁宁;黄桢钧;伍崇海;钟赟;刘世明
来源:中国病理生理杂志 2015 年 3期