为探讨热休克预处理对过氧化氢所致C2C12肌原细胞凋亡和第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体释放的影响,采用0.5 mmol/L过氧化氢作用于C2C12肌原细胞.Hoechst33258荧光染色,观察细胞形态学改变并计算凋亡百分率,抽提DNA作琼脂糖电泳,以确定细胞凋亡情况.采用天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹观察天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化情况.采用免疫荧光及细胞成分分离后蛋白质印迹检测第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物从线粒体的释放.结果发现,过氧化氢处理1～2 h,第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物逐渐从线粒体释放入胞浆;处理4 h天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9活性升高,12 h达高峰;处理24 h细胞明显出现凋亡,凋亡百分率明显升高.热休克预处理可诱导C2C12肌原细胞中热休克蛋白90,热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白的表达增高;抑制第二种线粒体释放的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物释放、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9的活化及细胞凋亡的发生.结果提示,线粒体信号通路在过氧化氢所致的心肌细胞凋亡中发挥
作者：蒋碧梅；肖卫民；石永忠；刘梅冬；唐道林；肖献忠
来源：中国动脉硬化杂志 2004 年 12卷 2期
