目的 研究用慢病毒载体法建立乳腺癌α2,3-唾液酸转移酶ST3 GalⅢ基因RNA干扰(RNAi)的细胞模型.方法 针对ST3 Gal Ⅲ基因设计4组短发夹RNA序列,合成DNA与线性化的pGLV3-H1-GFP载体连接,构建慢病毒载体质粒.鉴定后,进行病毒包装和病毒滴度检测;将获得的重组慢病毒pGLV3-H1-GFP-shST3转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,将转染细胞分为3组:空白组,未转染组(mock cells,M);对照组(转染对照慢病毒,parent cells,P);干扰组,转染慢病毒载体pGLV5-H1-GFP-shST3(shST3-1,2,3,4).以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,经嘌呤霉素抗性筛选;用实时定量PCR 、Western blot检测转染后MDA-MB-231细胞中ST3Gal ⅢmRNA及蛋白表达,以流式细胞术分析细胞表面α2,3-唾液酸水平.结果 成功构建针对ST3Gal Ⅲ基因的RNAi慢病毒载体,病毒悬液滴度均＞2×108TU·mL-1.各转染细胞的转染效率达90％以上;经嘌呤霉素筛选后,干扰组的ST3 GalⅢmRNA的抑制率分别为42.1％,66.7％,30.1％,80.9％及蛋白表达水平分别下降了35.92％,75.64％,37.12％,81.75％.与对照组比较,干扰组细胞ST3 GalⅢ基因的mRNA及蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P ＜0.05);shST3-4组细胞表面α2,3-唾液酸水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建了乳腺癌ST3

作者：宋娟；王宏兰；王玉春；田华；夏春辉；沈业彤；崔红霞

来源：中国临床药理学杂志 2017 年 33卷 8期