目的:探索靶向沉默Eps8(表皮生长因子受体通路底物8)基因对人慢性髓系白血病K562细胞生物学活性的影响及其可能的分子机制.方法:采用慢病毒介导RNA干扰技术靶向沉默K562细胞中Eps8基因.实验分组为:空白对照(blank control)组、Eps8-shRNA靶向沉默(K562-shRNA)组和阴性对照(K562-NC)组.在荧光显微镜下观察转染效率;应用RT-PCR法和Western blot法分别从mRNA转录水平和蛋白水平验证Eps8基因沉默效率;台盼蓝拒染法和MTT法检测细胞体外增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡率变化;甲基纤维素克隆形成实验验证细胞集落形成能力;Western blot法检测沉默Eps8基因后AKT/mTOR及其下游信号通路磷酸化蛋白的表达情况.结果:成功建立稳定低表达Eps8的K562细胞株(K562-shRNA)和阴性对照细胞株(K562-NC).与空白对照组和K562-NC组相比,沉默Eps8基因后K562-shRNA组细胞Eps8转录和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01);体外培养48 h后,K562-shRNA组细胞增殖能力明显下降(P＜0.05);K562-shRNA组细胞凋亡率为(5.81±0.39)％,空白对照组和K562-NC组细胞凋亡率分别为(1.02±0.70)％和(1.19±0.15)％,提示K562-shRNA组细胞凋亡率与空白对照组和K562-NC组之间有显著性差异(P＜0.05),而空白对照组和K562-NC组之间没有显著性差异(P＞0.05

作者：宁晶璇；贺艳杰；李玉华

来源：中国实验血液学杂志 2018 年 26卷 1期