目的 研究毕赤酵母中高效表达全长MAP30蛋白及其生物活性.方法 根据GeneBank公布的MAP30全序列设计特异性引物,以苦瓜基因组为模板,PCR扩增MAP30全长基因,将该基因插入pPIC9k载体中,经Sac I酶切线性化后,电转化至GS115细胞,再通过G418筛选,最终获得了高拷贝重组GS115菌株.重组菌株在甲醇诱导下,SDS-PAGE分析表达的特异性条带,运用Pharmacia VDS图像分析软件进行条带密度扫描,得到各条带的扫描曲线图,计算出同一泳道目的 蛋白条带峰面积相对于整个曲线所占的百分比,即蛋白纯度,并根据蛋白纯度和上清蛋白总量(Lowry法)计算出发酵上清液中目标蛋白含量.纯化时首先用75
作者：朱振洪；杨威威；葛立军；万海同
来源：中国医药生物技术 2010 年 5卷 2期
