目的：构建Stathmin基因毕赤酵母表达体系，并对表达产物进行纯化和鉴定，为Stathmin相互作用蛋白的进一步研究提供实验基础。方法通过 PCR方法从SKBR3乳腺癌细胞中扩增出人Stathmin基因片段，克隆入毕赤酵母表达载体pPIC 3．5K ，构建重组载体pPIC3．5K‐Stathmin ，转化GS115工程菌，经含基因素（G418）的酵母膏胨葡萄糖琼脂（YPD）培养基筛选出阳性克隆。用0．5％甲醇诱导表达，并用十二烷基硫酸钠‐聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS‐PAGE）及Western Blotting鉴定表达产物。结果 DNA测序结果表明，所获基因片段与Stathmin基因序列一致。在含有G418600μg／mL的YPD培养基上筛选出的pPIC 3．5K‐Stathmin转化子，经PCR鉴定为阳性克隆。SDS‐PAGE可见约37×103处有目的条带表达，经Western Blotting鉴定，此条带为Stathmin蛋白。结论成功构建了Stathmin酵母表达载体，并在毕赤酵母中表达成功，为Stathmin相互作用蛋白研究以及生物治疗药物的制备奠定了基础。
作者：杨铭；林芳；和婷；董轲；张惠中
来源：国际检验医学杂志 2016 年 37卷 9期
