研究提取人参叶中的总RNA,采用RT-PCR扩增人参叶Cu/Zn-SOD基因,构建pET-28 (a)-Cu/Zn-SOD原核表达载体.使用Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达.利用镍离子亲和层析进行纯化,并采用黄嘌呤氧化酶法测定目的蛋白的酶活.经RT-PCR扩增的人参Cu/Zn-SOD基因序列与GenBank数据库中公布的高丽参Cu/Zn-SOD基因序列同源性为99.00％.经IPTG诱导,目的蛋白的表达量约为44.42％,相对分子质量为16.30 kDa.纯化后的蛋白酶活可达到10 596.69 U·mg-1.通过分子生物学方法,成功构建了人参pET-28(a)-Cu/Zn-SOD原核表达载体,为进一步研究人参Cu/Zn-SOD生物学功能奠定了基础.
作者：林红梅；王泽玉；邵玥；秦晓晔；刘诗超；张鑫；杨利民
来源：中国中药杂志 2013 年 38卷 23期
