目的 应用两组三重PCR方法检测非O157:H7型STEC的6种毒力基因stx1、stx2、eae、hly、etpD、katP.方法 对多重PCR方法进行改进优化,引入SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR熔解曲线分析的方法提高工作效率,并结合血清学分析的方法判定结果.建立检测产志贺毒素大肠埃希菌毒力基因的多重PCR方法,简化其分子危害性评估工作,提高检测的准确性与评估效率.结果 用模拟样品评估该方法,检测下限分别为:组1 stx1基因10 ng/ml、stx2基因120 ng/ml、eaeP基因110ng/ml;组二etpD基因165 ng/ml、katP基因85 ng/ml、hly基因15 ng/ml.其特异性和灵敏度与单一基因PCR扩增结果基本一致；而运用该方法对210例腹泻患者样品进行检测应用,得到13株非O157STEC菌株,其毒力基因为stx1基因均阳性,eae基因伴随存在,而hly、etpD、katP毒力基因呈散发性分布.结论 本研究建立的方法能够快速有效地进行非O157 STEC的毒力基因的检出和排查,既提高了检测效率,又可作为评估分子危害性的检查方法.
作者：王小光；张颖华；汪萍；陈秀华；骆玲飞；刘芸；刘继倩；宋驰萍；欧阳霖
来源：中华实验和临床病毒学杂志 2013 年 27卷 5期
