目的 通过构建NALP3-siRNA,观察其抑制大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)NALP3表达的作用,探讨其对细胞缺氧复氧(HR)损伤的保护作用.方法 (1)利用三气培养箱调整氮气压力条件形成缺氧条件,缺氧1h,按复氧时间设复氧后1、2、4、8、16、24h组,分别检测细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)含量以及细胞NALP3蛋白的表达.(2)NRK-52E转染NALP3-siRNA质粒,Western印迹法检测转染细胞NALP3蛋白的表达.(3)将细胞分为正常对照组、HR组、无关siRNA转染组和NALP3-siRNA转染组.分别于缺氧1h、复氧4h检测培养液上清LDH的含量和细胞NALP3蛋白的表达.(4)采用Annexin V/PI染色结合流式细胞仪、Western印迹法、电泳迁移率实验(EMSA)分别检测细胞凋亡率、细胞IKB-α、Bax和Bcl-2蛋白的表达以及NF-κB DNA结合活性.结果 (1)与对照组相比,NRK-52E缺氧复氧后活细胞计数和细胞存活率显著下降(P＜0.05),细胞NALP3表达增加,在复氧4h达到高峰.(2)与无关siRNA转染组相比,NALP3-siRNA转染组NALP3蛋白表达水平显著下调(P＜0.05).(3)缺氧复氧后,与无关siRNA转染组相比,NRK-52E细胞NALP3蛋白表达显著下降(P＜0.05).(4)与对照组比较,HR后细胞IκB-α磷酸化和降解以及NF-κB DNA结合活性增加,细胞NALP3、Bcl-2和Bax蛋白的表达明显上调,而NALP3-siR

作者：冯娟；李荣山；乔晞；郝洁芦；王卫；赵宏宇；邵珊

来源：中华肾脏病杂志 2012 年 28卷 11期