目的 探讨乙型肝炎病毒X基因(HBx)转染人近端肾小管上皮细胞系HK-2细胞株后对其表达Notch1受体的影响,并观察Notch1受体在HBx介导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡中的作用.方法 用分子克隆的方法构建pcDNA3.1/myc-HBx质粒及pcDNA3.1/myc-Notch1质粒,转染HK-2细胞建立转染株,并应用短发夹RNA(shRNA)干扰技术沉默Notch1基因表达.将细胞分为7组:①正常培养组；②转染HBx空载质粒组；③转染HBx质粒组；④转染HBx质粒+Notch1空载质粒组；⑤转染HBx质粒+Notch1质粒组；⑥转染HBx质粒+Notch1 shRNA空载质粒组；⑦转染HBx质粒+ Notch1 shRNA沉默质粒组.实时定量PCR和Western印迹法验证HBx转染成功,检测细胞中Notch1受体的变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测各组细胞的生长抑制率,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.结果 HK-2细胞经转染HBx基因后可高表达HBx,Notch1 shRNA在HK-2细胞中的转染效率也高达70％,基因沉默有效；转染HBx基因组细胞Notch1水平明显高于正常培养组及转染HBx空载质粒组,且该组细胞凋亡率亦明显高于正常培养组及转染HBx空载质粒组,差异均有统计学意义(14.94％ ±0.32％比13.86％ ±0.18％、13.67％±0.54％,均P＜0.05).转染HBx质粒+Notch1质粒组细胞凋亡率明显低于HBx质粒+Notch1空载质粒组,差异有统计学

作者：王轩；周益；袁伟杰；朱楠；尚明花

来源：中华医学杂志 2013 年 93卷 4期