目的:克隆小鼠的多囊肾病1(PKD1)基因,构建PKD1基因的Knockout载体,为产生PKD1基因缺陷小鼠品系准备条件.方法:以正常小鼠基因组DNA为模板,扩增小鼠PKD1基因部分序列为探针,应用噬斑原位杂交技术筛选129SvTer小鼠基因组DNA文库,并应用Southern杂交、亚克隆及测序等方法鉴定所得克隆.对克隆到的PKD1基因组DNA片段进行结构分析,选择合适的亚克隆片段,以pTK-NEO质粒为框架构建目标载体.结果:筛选得到1个阳性克隆,证实了所得序列与基因库收录的序列一致,并成功构建了符合设计要求的目标载体.结论:克隆到含有PKD1基因目的区域的基因组DNA片段以及目标载体的成功构建,为建立小鼠PKD1胚胎干细胞基因打靶动物模型奠定了基础.
作者：郁胜强；胡以平；梅长林
来源：第二军医大学学报 1999 年 20卷 6期
