目的:构建含有人HCN2基因的真核表达载体.并观察在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达情况.方法:对人HCN2基因全序列进行分析,进行oligo设计,通过PCR,扩增HCN2全长eDNA,通过双酶切(XhoI和BamHI)装入真核表达载体plRES2-EGFP中,脂质体法转染入HEK293细胞中,利用真核表达载体中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对转染效率进行监测,采用反转录.聚合酶链反应检测HCN2 mRNA 表达,全细胞膜片钳技术检测HCN2通道电流.结果:测序及酶切结果表明HCN2基因正确,荧光显微镜下,转染细胞观察到绿色荧光,反转录-聚合酶链反应检测到HCN2 mRNA 表达,膜片钳检测到hHCN2基因编码的通道电流.结论:成功地构建了HCN2真核表达载体并进行了起搏通道HCN2基因的异源性表达.
作者：左广锋；陈绍良；徐艳；肖杭
来源：现代生物医学进展 2011 年 11卷 6期
