目的：研究脓毒症造成肾脏损伤时的自噬情况以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）信号通路的调节作用。方法：对大鼠盲肠进行结扎与穿刺（ CLP），对肾脏组织切片进行HE染色，并测定血清尿素氮和肌酐。通过Western blotting定量分析CLP大鼠肾脏损伤发生后不同时点自噬相关分子微管相关蛋白轻链3（LC3）Ⅰ／Ⅱ、beclin-1和Akt蛋白磷酸化的表达情况；体外用LPS诱导人近端肾小管上皮细胞株HK-2发生自噬，检测不同浓度LPS和不同刺激时间自噬相关分子LC3Ⅰ／Ⅱ和Akt蛋白磷酸化的表达情况；进一步使用PI3K抑制剂、Akt抑制剂和LPS刺激HK-2细胞观察自噬相关蛋白的表达情况及细胞的凋亡水平。结果：同对照组相比，CLP大鼠显微镜下可见肾损伤的典型病理改变，血清尿素氮和肌酐均有上升。 CLP肾脏损伤发生后，自噬相关蛋白LC3Ⅰ／Ⅱ、beclin-1含量及Akt磷酸化水平均有上升。 LPS刺激HK-2细胞后，随着刺激浓度的增加，p-Akt（308）表达量逐渐提高，而LC3Ⅰ／Ⅱ及p-Akt（472）的表达量在10 mg／L LPS刺激组最高。随着刺激时间的延长，p-Akt（308）表达量逐渐提高；LC3Ⅰ／Ⅱ表达量同p-Akt（472）在刺激8 h时最高；使用PI3K抑制剂及Akt抑制剂后，LPS诱导的LC3表达显著下调，HK-2细胞凋亡明显增加。结论：CLP
作者：向镜芬；杨祥；龚剑锋；雷伟健；邓艳琼；牟丹；钟国权；孟启勇
来源：中国病理生理杂志 2014 年 6期
