目的 对人GJB3基因c.538C>T点突变进行生物信息学及功能分析,预测并验证其致病性.方法 聚合酶链反应扩增含GJB3基因c.538C>T突变的编码区全序列,DNA测序验证后与T载体连接,再通过重组DNA技术,将GJB3基因编码区全序列导入pEGFP-N1载体,构建了GJB3基因野生型(pEGFP-Cx31-WT)和突变型(pEGFP-Cx31-R180X)表达载体,验证并纯化后,分别转染人胚肾HEK293细胞,观察EGFP-Cx31融合蛋白在细胞内定位表达情况.通过生物信息学方法分析c.538C>T突变前后,Cx31蛋白的三维空间结构和平均势能变化.结果 细胞内荧光定位结果显示GJB3c.538C>T突变后,Cx31蛋白只于胞内表达,未能正常形成细胞间隙连接结构.而生物信息学分析结果也表明突变后Cx31蛋白的三维空间结构和Anolea原子平均势能均发生了明显变化.结论 GJB3基因c.538C>T点突变导致其编码的Cx31蛋白的结构与功能发生变化,可能通过影响细胞间隙连接的形成,从而导致遗传性耳聋的发生.
作者：王帅；魏钦俊；范燚；鲁雅洁；邢光前；曹新
来源：医学分子生物学杂志 2013 年 10卷 1期
