目的 探讨变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)检测视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)Rb1基因外显子突变的情况.方法 收集25例RB患者的肿瘤组织和3例健康者的外周血.提取其基因组,扩增Rb1基因的第3、7、9、12和26个外显子片段,再以DHPLC和DNA直接测序法分别检测其突变情况并进行比较.结果 所有模板均扩增出5个外显子片段.DHPLC分析得第3、7、9、12和26个外显子的最优化检测柱温分别为54.4、55.2、53.4、53.4和55.2 ℃;第3、7、9和12个外显子中,25例患者和3例健康者均呈现同样峰形;而第26个外显子中,有2例患者呈现不同峰形.对所有片段进行测序,第3、7、9和12外显子的扩增片段中未发现突变.而外显子26的扩增片段中,DHPLC峰形和其他片段不同的2个样品也未出现突变.DHPLC和直接测序结果的差异无统计学意义(P>0.05).结论 DHPLC能快速检测出Rb1基因外显子片段的突变位点,可以用于RB的检测.
作者：王蔚；黄倩；钱江；程琰；吴继红；徐萍；张圣海
来源：中国眼耳鼻喉科杂志 2010 年 10卷 1期
